Считалось, что из всех РНК-содержащих вирусов только ретровирусы способны синтезировать ДНК на матрице своей РНК и встраиваться в геном хозяйской клетки. Как выяснилось, другие РНК-содержащие вирусы тоже умеют это делать, хотя у них нет генов, необходимых для обратной транскрипции (синтеза ДНК на матрице РНК). Встраивание этих вирусов в хромосомы хозяина происходит благодаря своеобразной кооперации с уже обжившимися в хозяйском геноме ретровирусами.
Ретровирусы отличаются от других РНК-содержащих вирусов тем, что в их геноме есть ген обратной транскриптазы — фермента, который осуществляет синтез ДНК на матрице вирусной РНК. Эта ДНК затем встраивается в геном хозяйской клетки и начинает размножаться вместе с ним. Если это произойдет в половой клетке, встроенный ретровирус может начать передаваться по наследству в череде поколений организмов-хозяев, то есть стать эндогенным ретровирусом. Утратив в результате мутаций инфекционность — то есть способность передаваться горизонтально от одного хозяина к другому — эндогенный ретровирус превращается в ретротранспозон. Ретротранспозон может размножаться только внутри хозяйских клеток, встраиваясь в разные места генома и внося сумятицу в работу генетических систем хозяина. Возможен и обратный процесс — превращение ретротранспозонов в активные ретровирусы.
Другие РНК-содержащие вирусы обходятся без обратной транскрипции и встраивания в хозяйский геном. У них нет генов обратных транскриптаз, зато есть гены РНК-зависимых РНК-полимераз — ферментов, которые просто размножают молекулы РНК, минуя стадию ДНК.
До сих пор считалось, что такие вирусы не могут встраивать свой наследственный материал в геном хозяина (или, точнее, что это может происходить лишь исключительно редко, в силу стечения ряда маловероятных обстоятельств; необходимо помнить, что в биологии почти нет абсолютно строгих правил такого рода — любой догматизм здесь противопоказан).
В 1997 году швейцарские биологи установили, что в хромосомах мышей после заражения РНК-содержащим вирусом LCMV (lymphocytic choriomeningitis virus) систематически обнаруживаются фрагменты вирусного генома, а именно гены вирусного гликопротеина (GP) и нуклеопротеина (NP). Как происходит синтез ДНК на матрице вирусной РНК при отсутствии у вируса LCMV обратной транскриптазы, никто не знал.
В последнем номере журнала Science те же исследователи в соавторстве с коллегами из Франции и США сообщили о расшифровке механизма этого явления. Как выяснилось, в роли «троянского коня», обеспечивающего встраивание в хозяйский геном не приспособленного к этому вируса, выступает эндогенный ретровирус IAP (intracisternal A-type particle), около 1000 копий которого рассеяно по всему мышиному геному. IAP давно утратил инфекционность, поэтому его одинаково правильно называть и эндогенным ретровирусом, и ретротранспозоном. Впрочем, и ретротранспозонная активность сохранилась только у небольшой части копий IAP.
Известно, что IAP активизирует свою деятельность (то есть начинает транскрибироваться и, возможно, встраиваться в другие места генома) во время сперматогенеза (это свойственно и другим мобильным генетическим элементам), а также в тимусе, где лимфоциты подвергаются целенаправленным геномным перестройкам. Однако реальная роль IAP в мышиной физиологии и эволюции толком не известна.
Исследователи заражали мышиные клетки вирусом LCMV до тех пор, пока не получили две линии клеток, содержащих в своем геноме вирусные гены. Затем из этих клеток были выделены и размножены фрагменты геномной ДНК, включающие гены LCMV, вместе с прилегающими участками.
Оказалось, что в обеих линиях произошло встраивание в хозяйский геном вирусного гена GP. В одной линии клеток вирусный ген встроился в 7-ю хромосому, в другой — в 10-ю. Самое главное, что в обоих случаях к встроенному вирусному гену непосредственно прилегает нуклеотидная последовательность ретротранспозона IAP.
Это позволило ученым предположить, что обратная транскрипция вирусного генома и последующее встраивание получившейся ДНК в хозяйский геном были осуществлены благодаря деятельности ферментов, кодируемых ретротранспозоном IAP.
Чтобы проверить это предположение, исследователи вводили активные копии мышиного ретротранспозона IAP в клетки других видов млекопитающих (человека, зеленой мартышки, собаки и китайского хомячка), у которых интеграция генов LCMV в геном никогда не наблюдалась. В качестве контроля использовались клетки, в которые не вводили дополнительных генов или вводили ген зеленого светящегося белка. Затем все эти клетки заражали вирусом LCMV и смотрели, будет ли синтезироваться ДНК на матрице вирусной РНК.
В клетках всех четырех видов животных, в которые был введен ретротранспозон IAP, гены вируса LCMV подвергались обратной транскрипции (в среднем в 70% клеток). В контрольных клетках этого не произошло ни разу. Таким образом, IAP действительно необходим для встраивания генов LCMV в хозяйский геном, причем ретротранспозон успешно справляется с этой работой не только в клетках своего природного хозяина — мыши, но и в клетках других животных.
Используя в экспериментах разные варианты ретротранспозона IAP, исследователи установили, что для успешного встраивания LCMV необходимо наличие в составе IAP неповрежденных генов pol и gag (каждый из этих генов кодирует по несколько белков; обратная транскриптаза кодируется геном pol).
По-видимому, объединение фрагментов геномов IAP и LCMV происходит во время обратной транскрипции: обратная транскриптаза начинает синтезировать ДНК на матрице своей «родной» РНК, но в определенный момент она переходит на РНК вируса LCMV и продолжает синтез ДНК на этой новой матрице. Подобные «сбои» в ходе обратной транскрипции были известны и ранее.
Вирус LCMV может проникать в семенники мышей, где активно работают ретротранспозоны IAP. Теоретически LCMV мог бы встроиться в геном сперматозоида и стать наследственным, но до сих пор этого не произошло: в геномах мышей, не зараженных вирусом LCMV, не удалось обнаружить никаких фрагментов генома LCMV, несмотря на целенаправленный поиск.
Авторы отмечают, что полученные ими результаты необходимо учитывать при разработке новых методов генной терапии, основанных на создании искусственных РНК-содержащих вирусов с нужными пациенту генами. Ведь в геноме человека тоже есть немало эндогенных ретровирусов. Правда, почти все они неактивны, но некоторые, возможно, частично сохранили активность. Эти эндогенные ретровирусы теоретически могут обеспечить встраивание геномов искусственных РНК-содержащих вирусов в человеческие хромосомы, что может привести к плохо предсказуемым последствиям. Поэтому все новые терапевтические РНК-вирусы должны проходить предварительную проверку на способность встраиваться в хозяйский геном.
Источник : Markus B. Geuking, Jacqueline Weber, Marie Dewannieux, Elieser Gorelik, Thierry Heidmann, Hans Hengartner, Rolf M. Zinkernagel, Lars Hangartner. Recombination of Retrotransposon and Exogenous RNA Virus Results in Nonretroviral cDNA Integration // Science. 2009. V. 323. P. 393–396.
(Александр Марков elementy.ru)
Комментарии: (0)